5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU ) 5-溴-2’-脫氧尿苷

產(chǎn)品簡介：

BrdU，英文全稱5-bromo-2'-deoxyuridine，中文全稱5-溴-2’-脫氧尿苷，是一種合成的胸苷溴化類似物，在S期可替代胸苷選擇性插入細胞DNA。BrdU通常和廣泛用于測定DNA合成和標記分裂細胞，最后用來研究誘導細胞增殖的信號通路和其他生理過程。BrdU通過體外細胞培養(yǎng)或體內(nèi)注射的方式進行探針加載，然后用抗BrdU的抗體進行特異性檢測。

BrdU標記后，對組織或細胞進行固定和透化后，需要額外的DNA水解步驟（有時也稱DNA變性），從而允許抗BrdU的抗體能夠與插入DNA的BrdU結(jié)合。BrdU抗體能夠與其他細胞標記物如Ki67，雙皮質(zhì)素（DCX）和NeuN聯(lián)合使用來鑒定增殖細胞和新分化神經(jīng)元。

產(chǎn)品特性

1） CAS NO：59-14-3

2） 化學名：5-Bromo-1-[(2R,4S,5R)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]

pyrimidine-2,4-dione

3） 英文同義名：5-Bromodeoxyuridine, 5-bromo-2'-deoxy-uridine,5-Bromouracil deoxyriboside,Broxuridine, 5-Bromo-1-(2-deoxy-β-D-ribofuranosyl)uracil, Br-dU, BUdR, 5-BrdU

4） 中文同義名：5-溴去氧尿苷，5-溴脫氧尿苷，溴尿嘧啶苷，5-溴尿嘧啶-2’-脫氧核苷

5） 分子式：C₉H₁₁BrN₂O

6） 分子量：307.10 g/mol

7） 純度：≥99% (HPLC)

8） 外觀：白色至類白色粉末

9） 溶解性：溶于DMSO（20mg/ml），無水乙醇（~25mg/ml），水（10mg/ml）

保存條件: 

-20°C干燥保存，至少2年有效。

產(chǎn)品使用：

1. BrdU標記：體外標記細胞

制備BrdU儲存液（10mM）：稱取3mg BrdU（Mw：307.10）溶于1ml去離子水，充分溶解即可。

用細胞培養(yǎng)基按照1:1000的比例將儲存液稀釋到10μMBrdU染色液，并在無菌條件下用0.2μm濾膜對染色液進行過濾除菌。

吸掉細胞內(nèi)培養(yǎng)基并更換無菌的10μMBrdU染色液，置于CO2培養(yǎng)箱37oC孵育1-24h?！咀⒁狻浚?span>BrdU孵育時間取決于細胞分裂速度。原代細胞可能要高達24h，但快速增值細胞系可能僅需1h。達到最佳信噪比的時間需要通過優(yōu)化條件來確定。

吸掉細胞內(nèi)染色液，用PBS清洗2次，每次至少5s。

根據(jù)標準免疫細胞化學（ICC）操作流程進行細胞固定和透化。但是在開始免疫染色前需參照下述的DNA水解步驟。

2. BrdU標記：BrdU體內(nèi)標記

【注意】：BrdU體內(nèi)標記方法比較多，常見的有腹腔注射法（Intraperitoneal injection）和口服法。以下為腹腔注射法的步驟，其他方法可參考文獻或根據(jù)實驗室固有經(jīng)驗操作。

用1×PBS溶解適量的BrdU配制成10mg/ml儲存液，過濾除菌，按照單次用量分裝凍存后待用，避免反復凍融。

對于小鼠，通用情況注射濃度為100mg/kg。

BrdU標記完成后，根據(jù)實驗室已成的步驟處理動物。【注意】：BrdU插入快速分化組織比如小腸，在注射后30min就能檢測到。但大多數(shù)組織可能需要高達24h才能檢測到。合適的處理時間和注射劑量需要根據(jù)組織類型來優(yōu)化。

3. DNA水解（DNA變性步驟）

3.1  細胞樣本

用1-2.5M HCl室溫孵育細胞10min-1h，實際的HCl濃度和孵育時間根據(jù)實驗來優(yōu)化。如果使用更短的孵育時間，37°C孵育可能比室溫孵育效果更好

可選步驟：去除HCl，用0.1M硼酸鈉緩沖液，pH 8.5室溫中和30min?！咀⒁狻浚?span>0.1M硼酸鈉緩沖液（pH 8.5）配置方法：稱取3.8g硼酸鈉（Mw=381.4）加入100ml蒸餾水，充分溶解后，用NaOH調(diào)整到所需pH。
用PBS清洗3次，每次不少于5s。

根據(jù)標準ICC操作流程繼續(xù)后續(xù)染色。

3.2 組織切片

【注意】：對于石蠟切片必須先做脫蠟處理再進行DNA水解步驟。

用1-2 M HCl室溫孵育切片30min-1h，實際的HCl濃度和孵育時間根據(jù)實驗來優(yōu)化。如果使用更短的孵育時間，37°C孵育可能比室溫孵育效果更好。

可選步驟：去除HCl，用0.1M硼酸鈉緩沖液（pH 8.5）室溫中和切片10min?！咀⒁狻浚?span>0.1M硼酸鈉緩沖液，pH 8.5配置方法：稱取3.8g硼酸鈉（Mw=381.4）加入100ml蒸餾水，充分溶解后，用NaOH調(diào)整到所需pH。

用PBS清洗3次，每次不少于5s。

根據(jù)標準IHC操作流程繼續(xù)免疫染色步驟。

注意事項：

1.      BrdU是一種誘變劑，操作過程一定要注意防護，不要與皮膚直接接觸。另戴口罩避免粉塵吸入。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關(guān)內(nèi)容（與anti-BrdU的共染色）

目的：BrdU常與其他抗體聯(lián)合使用以鑒定增殖和新分化神經(jīng)元。常見以下3個指標：

Ki67：反映增殖的細胞標記物，細胞周期G1，S，G2和M期有Ki67表達，但靜止期G0無Ki67表達。Ki67抗體能夠替代或與Brdu聯(lián)合使用來標記增殖神經(jīng)元。

雙皮質(zhì)素（Doublecortin，DCX）：微管相關(guān)的磷酸蛋白，由未成熟神經(jīng)元表達。可與BrdU聯(lián)合使用鑒定未成熟的有絲分裂后神經(jīng)元。

NeuN：成熟神經(jīng)元標記物，能與BrdU聯(lián)合染色去鑒定新分化的神經(jīng)元。