5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU ) 5-溴-2’-脫氧尿苷

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

BrdU，英文全稱(chēng)5-bromo-2'-deoxyuridine，中文全稱(chēng)5-溴-2’-脫氧尿苷，是一種合成的胸苷溴化類(lèi)似物，在S期可替代胸苷選擇性插入細(xì)胞DNA。BrdU通常和廣泛用于測(cè)定DNA合成和標(biāo)記分裂細(xì)胞，最后用來(lái)研究誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的信號(hào)通路和其他生理過(guò)程。BrdU通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)或體內(nèi)注射的方式進(jìn)行探針加載，然后用抗BrdU的抗體進(jìn)行特異性檢測(cè)。

BrdU標(biāo)記后，對(duì)組織或細(xì)胞進(jìn)行固定和透化后，需要額外的DNA水解步驟（有時(shí)也稱(chēng)DNA變性），從而允許抗BrdU的抗體能夠與插入DNA的BrdU結(jié)合。BrdU抗體能夠與其他細(xì)胞標(biāo)記物如Ki67，雙皮質(zhì)素（DCX）和NeuN聯(lián)合使用來(lái)鑒定增殖細(xì)胞和新分化神經(jīng)元。

產(chǎn)品特性

1） CAS NO：59-14-3

2） 化學(xué)名：5-Bromo-1-[(2R,4S,5R)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]

pyrimidine-2,4-dione

3） 英文同義名：5-Bromodeoxyuridine, 5-bromo-2'-deoxy-uridine,5-Bromouracil deoxyriboside,Broxuridine, 5-Bromo-1-(2-deoxy-β-D-ribofuranosyl)uracil, Br-dU, BUdR, 5-BrdU

4） 中文同義名：5-溴去氧尿苷，5-溴脫氧尿苷，溴尿嘧啶苷，5-溴尿嘧啶-2’-脫氧核苷

5） 分子式：C₉H₁₁BrN₂O

6） 分子量：307.10 g/mol

7） 純度：≥99% (HPLC)

8） 外觀：白色至類(lèi)白色粉末

9） 溶解性：溶于DMSO（20mg/ml），無(wú)水乙醇（~25mg/ml），水（10mg/ml）

保存條件: 

-20°C干燥保存，至少2年有效。

產(chǎn)品使用：

1. BrdU標(biāo)記：體外標(biāo)記細(xì)胞

制備BrdU儲(chǔ)存液（10mM）：稱(chēng)取3mg BrdU（Mw：307.10）溶于1ml去離子水，充分溶解即可。

用細(xì)胞培養(yǎng)基按照1:1000的比例將儲(chǔ)存液稀釋到10μMBrdU染色液，并在無(wú)菌條件下用0.2μm濾膜對(duì)染色液進(jìn)行過(guò)濾除菌。

吸掉細(xì)胞內(nèi)培養(yǎng)基并更換無(wú)菌的10μMBrdU染色液，置于CO2培養(yǎng)箱37oC孵育1-24h?！咀⒁狻浚?span>BrdU孵育時(shí)間取決于細(xì)胞分裂速度。原代細(xì)胞可能要高達(dá)24h，但快速增值細(xì)胞系可能僅需1h。達(dá)到最佳信噪比的時(shí)間需要通過(guò)優(yōu)化條件來(lái)確定。

吸掉細(xì)胞內(nèi)染色液，用PBS清洗2次，每次至少5s。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）操作流程進(jìn)行細(xì)胞固定和透化。但是在開(kāi)始免疫染色前需參照下述的DNA水解步驟。

2. BrdU標(biāo)記：BrdU體內(nèi)標(biāo)記

【注意】：BrdU體內(nèi)標(biāo)記方法比較多，常見(jiàn)的有腹腔注射法（Intraperitoneal injection）和口服法。以下為腹腔注射法的步驟，其他方法可參考文獻(xiàn)或根據(jù)實(shí)驗(yàn)室固有經(jīng)驗(yàn)操作。

用1×PBS溶解適量的BrdU配制成10mg/ml儲(chǔ)存液，過(guò)濾除菌，按照單次用量分裝凍存后待用，避免反復(fù)凍融。

對(duì)于小鼠，通用情況注射濃度為100mg/kg。

BrdU標(biāo)記完成后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室已成的步驟處理動(dòng)物?！咀⒁狻浚?span>BrdU插入快速分化組織比如小腸，在注射后30min就能檢測(cè)到。但大多數(shù)組織可能需要高達(dá)24h才能檢測(cè)到。合適的處理時(shí)間和注射劑量需要根據(jù)組織類(lèi)型來(lái)優(yōu)化。

3. DNA水解（DNA變性步驟）

3.1  細(xì)胞樣本

用1-2.5M HCl室溫孵育細(xì)胞10min-1h，實(shí)際的HCl濃度和孵育時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)來(lái)優(yōu)化。如果使用更短的孵育時(shí)間，37°C孵育可能比室溫孵育效果更好

可選步驟：去除HCl，用0.1M硼酸鈉緩沖液，pH 8.5室溫中和30min。【注意】：0.1M硼酸鈉緩沖液（pH 8.5）配置方法：稱(chēng)取3.8g硼酸鈉（Mw=381.4）加入100ml蒸餾水，充分溶解后，用NaOH調(diào)整到所需pH。
用PBS清洗3次，每次不少于5s。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)ICC操作流程繼續(xù)后續(xù)染色。

3.2 組織切片

【注意】：對(duì)于石蠟切片必須先做脫蠟處理再進(jìn)行DNA水解步驟。

用1-2 M HCl室溫孵育切片30min-1h，實(shí)際的HCl濃度和孵育時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)來(lái)優(yōu)化。如果使用更短的孵育時(shí)間，37°C孵育可能比室溫孵育效果更好。

可選步驟：去除HCl，用0.1M硼酸鈉緩沖液（pH 8.5）室溫中和切片10min。【注意】：0.1M硼酸鈉緩沖液，pH 8.5配置方法：稱(chēng)取3.8g硼酸鈉（Mw=381.4）加入100ml蒸餾水，充分溶解后，用NaOH調(diào)整到所需pH。

用PBS清洗3次，每次不少于5s。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)IHC操作流程繼續(xù)免疫染色步驟。

注意事項(xiàng)：

1.      BrdU是一種誘變劑，操作過(guò)程一定要注意防護(hù)，不要與皮膚直接接觸。另戴口罩避免粉塵吸入。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

相關(guān)內(nèi)容（與anti-BrdU的共染色）

目的：BrdU常與其他抗體聯(lián)合使用以鑒定增殖和新分化神經(jīng)元。常見(jiàn)以下3個(gè)指標(biāo)：

Ki67：反映增殖的細(xì)胞標(biāo)記物，細(xì)胞周期G1，S，G2和M期有Ki67表達(dá)，但靜止期G0無(wú)Ki67表達(dá)。Ki67抗體能夠替代或與Brdu聯(lián)合使用來(lái)標(biāo)記增殖神經(jīng)元。

雙皮質(zhì)素（Doublecortin，DCX）：微管相關(guān)的磷酸蛋白，由未成熟神經(jīng)元表達(dá)。可與BrdU聯(lián)合使用鑒定未成熟的有絲分裂后神經(jīng)元。

NeuN：成熟神經(jīng)元標(biāo)記物，能與BrdU聯(lián)合染色去鑒定新分化的神經(jīng)元。