Invivogen ant-bl-1  Blasticidin solution（10mg/ml）

Invivogen原裝產(chǎn)品，現(xiàn)貨供應。

基本介紹：

Blasticidin S（殺稻瘟菌素），也稱為稻瘟散，滅瘟素S鹽酸鹽，從灰色鏈霉菌Streptomyces griseochromogenes分離到的一種核苷肽類抗生素。

作用機制：主要通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性抑制原核和真核細胞的蛋白質(zhì)合成。

Blasticidin S用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉(zhuǎn)染細胞。殺稻瘟菌素S具有快速而強效的作用模式，一個星期內(nèi)完成陽性克隆的篩選，且很低的抗生素濃度便能導致細胞迅速死亡。

抗性基因：

三種殺稻瘟菌素抗性基因已被克隆且測序：一種是乙酰轉(zhuǎn)移酶基因，來自殺稻瘟菌素產(chǎn)生菌的bls基因；另外兩種是脫氨酶基因（deaminase genes），分別為來自bacillus cereus蠟樣芽孢桿菌的bsr基因，和來自Aspergillus terreus土曲霉的BSD基因。bsr和BSD基因是最主要的選擇性標記基因，用于哺乳動物和植物細胞的轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?。雖然bsr和BSD基因多用于哺乳動物細胞的篩選標記，但也可以用于E. Coli。

篩選濃度：

A、大腸桿菌（E. Coli）【常用濃度：25-100μg/ml】

E. Coli對Blasticidin敏感性很弱，但含Blasticidin抗性的轉(zhuǎn)化子可在低鹽LB固體培養(yǎng)基（pH 8.0），100μg/ml Blasticidin的條件下進行篩選。高pH可增強抗生素篩選活性，為了達到最佳效果，推薦使用Invivogen公司的Fast-Media?Blas培養(yǎng)基聯(lián)合篩選。

B、哺乳動物（Mammalian Cells）【常用濃度：1-10μg/ml】

哺乳動物細胞系Blasticidin的常用工作濃度范圍1-10μg/ml，少數(shù)情況高達30μg/ml。初次實驗建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。

某些細胞系用Blasticidin進行篩選的建議濃度：

實驗步驟：

1）Blasticidin S通常使用濃度為1-10μg/ml，初次實驗建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。

2）轉(zhuǎn)染48h后，用含適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基將細胞傳代；（注：細胞處于活躍分裂期時抗生素工作最好。細胞密度太高，抗生素效率降低。分盤時覆蓋率最好不超過25%）

3）每3-4天去除培養(yǎng)基，加入含相同濃度Blasticidin的新鮮培養(yǎng)基；

4）7天后檢測細胞集落形成。根據(jù)宿主細胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要再增加一周或更久。

5）轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆到35mm細胞培養(yǎng)盤。加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天，再進行后續(xù)實驗。

質(zhì)量控制：

濃度10mg/ml，每一批次都經(jīng)過嚴格檢測，確保每一批次間產(chǎn)品質(zhì)量連續(xù)穩(wěn)定。

純度：≥ 95% (HPLC)
內(nèi)毒素水平：<1 EU/mg
理化特性：pH7.5, 透明
細胞培養(yǎng)檢測：用Blasticidin敏感和Blasticidin抗性哺乳動物細胞系檢測產(chǎn)品活性
無細胞毒性痕量污染物：長期培養(yǎng)Blasticidin抗性細胞確認無細胞毒性 

保存：

4°C短期或-20°C長期保存，避免反復凍融。