7-Azido-4-methylcoumarin (AzMC)

硫化氫熒光探針

【溫馨提示】：見(jiàn)我司整理的硫化氫（H2S）熒光探針產(chǎn)品專(zhuān)題—WSP-1/WSP-5/AzMC。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

7-Azido-4-methylcoumarin (AzMC)是一種用于硫化氫（H2S）檢測(cè)的香豆素?zé)晒馓结?。在?span>H2S的體系內(nèi)，該化合物上的芳香疊氮功能基團(tuán)被還原生成7-氨基-4-甲基香豆素（AMC），伴隨著在λex = 365 nm和λem = 450 nm處的熒光增強(qiáng)。AzMC既可用于體外監(jiān)測(cè)H2S的酶促生成，也可用于觀察活細(xì)胞中的H2S。AzMC對(duì)H2S具高度的靈敏度和選擇性，體外AzMC（10μM）可用于200nM-100μM范圍內(nèi)的H2S檢測(cè)。在含mM濃度的半胱氨酸、同型半胱氨酸、谷胱甘肽和多種其他常見(jiàn)的生物分析物的存在下選擇性地與H2S進(jìn)行反應(yīng)。AzMC可用作鑒定新型胱硫醚β合成酶（CBS）抑制劑和激活劑的一款工具。AzMC可用于監(jiān)測(cè)PLP依賴(lài)的酶活性（比如：胱硫醚β合成酶（CBS）、胱硫醚γ-裂解酶（CSE）、色氨酸合酶（TS））。適用于高通量篩選。

產(chǎn)品特性：

1）  CAS NO：95633-27-5

2）  化學(xué)名：7-azido-4-methyl-2H-1-benzopyran-2-one

3）  分子式：C₁₀H₇N₃O₂

4）  分子量：201.2

5）  外觀：白色至黃色固體

6）  純度：≥95%

7）  溶解性：溶于DMSO

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，至少2年有效。 

產(chǎn)品使用：

1、 儲(chǔ)存液制備

將低溫保存的產(chǎn)品從冰箱取出，置于室溫回溫至少20min。低速離心3-5min。之后往瓶?jī)?nèi)加入適量無(wú)水DMSO充分溶解配成10mM儲(chǔ)存液（比如，1mgAzMC（Mw: 201.2）加入497μl DMSO）。按照單次用量分裝避光凍存，避免反復(fù)凍融，至少3個(gè)月穩(wěn)定。

2、 工作濃度

正式實(shí)驗(yàn)前，取10mM儲(chǔ)存液用適當(dāng)緩沖液或培養(yǎng)基稀釋到所需工作濃度即可。具體的工作濃度請(qǐng)參考文獻(xiàn)或根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)需求來(lái)進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。參考下方一些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，來(lái)自公開(kāi)文獻(xiàn)，僅作參考。

應(yīng)用示例1：使用AzMC來(lái)測(cè)定體外重組人CBS催化H2S生成水平。96孔板中，酶反應(yīng)緩沖液體積為180μl，包含：200 mM Tris-HCl pH 8.0, 5 μM吡哆醛-5-磷酸酯（PLP），10 mM谷胱甘肽和0.5 mg/ml BSA。AOAA或 YD0171加入10μl。CBS（5 μg/孔）按照10μl體積加。AzMC（10 μM）和CBS底物L-半胱氨酸和高半胱氨酸（終濃度2.5mM）按照10μl體積加，最終總的反應(yīng)體系是200μl。37℃孵育1h，之后測(cè)定450nm下的熒光值（λex = 365 nm）。

【文獻(xiàn)來(lái)源：Chao, C., Zatarain, J.R., Ding, Y. et al. Cystathionine-β-Synthase Inhibition for Colon Cancer: Enhancement of the Efficacy of Aminooxyacetic Acid via the Prodrug Approach. Mol Med 22, 361–379 (2016). 】

應(yīng)用示例2：使用AzMC測(cè)定豬氣管上皮細(xì)胞的胞內(nèi)H2S生成。氣管組織圓片（6.9mm直徑）用鋒利的不銹鋼打孔器制備，之后放到緩沖液中（含20 μM AzMC）。在圓周振蕩器上室溫避光孵育1h，之后轉(zhuǎn)移到96孔板（7.0mm孔徑），并加入100μl相同的反應(yīng)緩沖液覆蓋組織。于熒光酶標(biāo)儀測(cè)定熒光值（激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別是365nm和450nm）。

【文獻(xiàn)來(lái)源：Krause NC, Kutsche HS, Santangelo F, DeLeon ER, Dittrich NP, Olson KR, Althaus M. Hydrogen sulfide contributes to hypoxic inhibition of airway transepithelial sodium absorption. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2016 Sep 1;311(3):R607-17. Epub 2016 Jul 20. PMID: 27440715.】

應(yīng)用示例3：使用AzMC來(lái)測(cè)定RAECs細(xì)胞中的H2S生成。RAECs 細(xì)胞用50μM AzMC（PBS）孵育30min，之后用PBS清洗3次。之后在熒光顯微鏡下觀察H2S與AzMC反應(yīng)后產(chǎn)生的熒光信號(hào)。

Fig 1.H2S content and the level of CSE were decreased under hyperglycaemia and hyperlipidaemia states. (A) RAECs were treated with 40 mM glucose, 200 μM palmitate, 100 μM NaHS and 2 μM Mito-Tempo for 48 hrs, and the H2S level were detected. The fluorescence of H2S was observed by fluorescence microscope, and the nuclei were pointed out by the arrow. (n = 4, **P < 0.01 versus control group. ##P < 0.01 versus HG+Pal group). (B) The CSE level of RAECs was tested by Western blotting. (n > 5, *P < 0.05 versus control group, #P < 0.05 versus HG+Pal group).

注意事項(xiàng)：

1.       整個(gè)染色過(guò)程中需注意避光。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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