Enhanced Green Fluorescent Protein

(EGFP) 重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白  

產(chǎn)品簡介：

綠色熒光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP），通常稱作增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP），廣泛使用的一種野生型綠色熒光蛋白（wt-GFP）變體。wt-GFP天然存在于水母（Aequorea victoria）中，1962年被Osamu Shimomura發(fā)現(xiàn)，鑒定為化學(xué)發(fā)光蛋白-水母發(fā)光蛋白（Aequorin）的伴侶蛋白。wt-GFP分子量為26,854.26 Da，等電點(diǎn)（PI）為5.80。wt-GFP具有一個(gè)次激發(fā)峰（波長：~490nm）和主激發(fā)峰（波長：395nm），兩個(gè)的最大發(fā)射峰都在505nm。wt-GFP的主要特征在于普遍用于生物化學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。wt-GFP具有獨(dú)特的發(fā)光特性，不依賴任何輔因子或底物，只需分子氧。因此，常將wt-GFP和目的蛋白的基因融合表達(dá)，用來監(jiān)測目的蛋白表達(dá)或定位模式。

wt-GFP起初用作融合標(biāo)簽普遍用在許多細(xì)胞生物學(xué)應(yīng)用中，但仍存在一些明顯缺陷：①具有兩個(gè)激發(fā)峰（如上所述），490nm激發(fā)譜更適合成像用途，但表現(xiàn)出低振幅的短板。②生理溫度下蛋白折疊率相當(dāng)?shù)停?span>③生色團(tuán)成熟半衰期接近30min，限制了wt-GFP作為快速基因誘導(dǎo)的報(bào)告子。為了改進(jìn)這些缺陷，分子生物學(xué)家開發(fā)出稱為增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）的wt-GFP變體，含Phe-64-Leu（F64L）和Ser-65-Thr（S65T）兩處突變。EGFP的分子量為26,897.43 Da，等電點(diǎn)（PI）為5.58。以單體形式存在，與wt-GFP的二級結(jié)構(gòu)相同。S65T通過調(diào)控Glu22附近的離子態(tài)抑制395nm的主激發(fā)峰，使EGFP呈現(xiàn)出單一激發(fā)峰增（~490nm）。F64L提高蛋白在37℃的折疊率。重要的是，EGFP的密碼子序列優(yōu)化后更適合在哺乳動物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。

本品是在大腸桿菌內(nèi)重組表達(dá)的非糖基化、同型二聚體蛋白。經(jīng)親和純化所得，不僅純度高，且熒光信號強(qiáng)。重組EGFP分子量為26.9kDa，由239個(gè)氨基酸構(gòu)成，C端帶His標(biāo)簽，在WB分析中可通過GFP抗體和His-tag抗體來檢測。Ex/Em=488/509nm。重組EGFP是一種多用途的生物標(biāo)志物，用于監(jiān)測生理過程，觀察蛋白定位以及檢測體內(nèi)轉(zhuǎn)基因表達(dá)。

產(chǎn)品特性：

1） 同義名：Recombinant Enhanced Green Fluorescent Protein; rEGFP; recombinant EGFP;

2） 來源：大腸桿菌

3） 標(biāo)簽：His

4） 分子量：26.9 kDa

5） 外觀：粉末

6） 純度：≥95%（SDS-PAGE）

7） 溶解性：溶于水（1mg/ml）

8） 應(yīng)用：用作GFP表達(dá)研究的對照品，包括：用作SDS-PAGE和WB分析的標(biāo)準(zhǔn)品、熒光計(jì)、流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡校準(zhǔn)用、以及微注射進(jìn)入細(xì)胞和組織等；偶聯(lián)到其它蛋白上 

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，1年有效。

產(chǎn)品重溶：

將低溫保存的凍干產(chǎn)品置于室溫充分回溫，低速離心到管底，之后加入無菌去離子水配制成儲存液（0.5-1mg/ml），≤-20℃分裝避光保存。可加入載體蛋白（比如：0.1% BSA或HSA）延長保存周期，盡量避免反復(fù)凍融次數(shù)。

【注意】：本凍干粉非無菌，若需嚴(yán)格無菌，可通過低蛋白吸附力的濾膜過濾除菌，再使用。

熒光活性：

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料都存在淬滅問題，操作或保存過程中盡量避光，減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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