Di-2-ANEPEQ (JPW 1114) 膜電位熒光探針

產(chǎn)品簡介：

ANEP (AminoNaphthylEthenylPyridinium)染料由Leslie Loew和同事開發(fā)，是最靈敏且穩(wěn)定的快速響應(yīng)探針，能檢測亞毫秒級的膜電位變化。Di-4-ANEPPS（貨號：NBS3227）和Di-8-ANEPPS（貨號：NBS3228）在各種組織、細胞和模型膜系統(tǒng)中表現(xiàn)出相當一致的熒光強度變化率（10%熒光變化/100mV）。ANEP染料的電子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而，它們的熒光光譜對周圍的電場變化做出響應(yīng)。這些光學響應(yīng)足夠快來檢測興奮細胞（包括單個神經(jīng)元、心肌細胞和完整組織制備物）的瞬時電位變化。另外，ANEP染料的激發(fā)光譜呈現(xiàn)出電位依賴的遷移，從而使其能通過測定激發(fā)波長下的熒光比來定量膜電位。ANEP染料結(jié)構(gòu)上的差異使其適用于各種特定應(yīng)用。

電位敏感ANEP染料的特征：

① 兩性離子分子，在不同細胞和組織樣本中表現(xiàn)出最穩(wěn)定的電位響應(yīng)。

② 結(jié)合到磷脂膜上的最大激發(fā)和發(fā)射波長約為465/635nm【但光譜特征與環(huán)境密切關(guān)聯(lián)】

③ 非熒光直至結(jié)合到膜上

④ 溶于乙醇、DMSO和DMF【Di-2-ANEPEQ（貨號：NBS3229）是水溶性的ANEP染料】

⑤ 快速響應(yīng)探針，適用于檢測亞毫秒的膜電位變化

Di-2-ANEPEQ，又稱為JPW 1114，一種快速響應(yīng)的膜電位探針。具高水溶性，通常以微注射的方式導(dǎo)入細胞。也能局部用于大腦組織。

基本特性：

1） CAS NO.：160605-94-7

2） 同義名：JPW 1114

3） 分子式：C26H35Br2N3 

4） 分子量：549.38g/mol

5） 外觀：橙色至暗紅色固體

6） 純度：≥95%（HPLC）

7） 熒光：λex 530 nm, λem 720 nm in ethanol【需注意：相較于在有機溶劑內(nèi)，苯乙烯染料與脂質(zhì)結(jié)合后通常發(fā)生很大的藍光遷移】

8） 溶解性：溶于DMSO、乙醇、DMF

保存條件: 

熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

產(chǎn)品使用：

1.儲存液制備

將低溫保存的凍干粉置于室溫回溫至少20min，低速離心后，將其溶于有機溶劑比如乙醇、DMSO或DMF配制成1mg/ml（~2mM）的儲存液。將儲存液避光保存在+4℃。

2.ANEP染料的細胞加載

2.1批量加載

爬片培養(yǎng)的貼壁細胞一般通過將少量的染料儲存液（比如溶于DMSO）加入細胞培養(yǎng)基（終濃度為0.2-2μM）進行標記即可。更高的染料濃度（10-50μM）用于標記灌注的組織樣本。通常要加0.05% Pluronic?F-127（貨號：NBS2009）在標記溶液內(nèi)，以提高染料的溶解（對于親脂性更高的ANEP染料比如Di-8-ANEPPS尤其不能省略）。低標記溫度（4-20℃）能抑制染料的內(nèi)在化。含探針的溶液孵育10-20min，細胞用不含染料的培養(yǎng)基清洗3次。

2.2逆行標記

特定的神經(jīng)元群細胞可通過定位壓力注射高濃度的染料溶液（10-20mg/ml，溶于DMSO或乙醇）進入神經(jīng)組織來實現(xiàn)標記。

2.3微注射

微電極尖端裝有3mg/ml（5.5mM）的Di-2-ANEPEQ水溶液，用于壓力微注射進入神經(jīng)元。在裝載進入電極前需立即過濾溶液以去除微小顆粒，防止阻塞電極尖端。

3.熒光測定

一般通過記錄激發(fā)在450nm和510nm，發(fā)射在＞570nm處的熒光強度來進行熒光比率成像測定。當膜超極化，熒光強度比率（F450/F510）降低。電位響應(yīng)的校準可通過使用離子載體纈氨霉素和添加不同鉀離子濃度到細胞外培養(yǎng)基來調(diào)整多種膜電位來實現(xiàn)。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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