DiO (DiOC18(3)) 細(xì)胞膜綠色熒光探針

【溫馨提示】：見我司整理的細(xì)胞膜熒光探針（Tracers for Membrane Labeling）產(chǎn)品專題 。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

DiI, DiO, DiD和 DiR作為一類長(zhǎng)鏈的親脂性二烷基碳菁類染料（Dialkylcarbocyanines）熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜以及其他脂溶性生物結(jié)構(gòu)。作為一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱）結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，于最佳濃度條件下可將整個(gè)細(xì)胞均勻染色。這些染料具很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。四種染料呈現(xiàn)不同的熒光顏色，DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC濾光器檢測(cè)，可結(jié)合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激發(fā)，具有比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(zhǎng)，特別適合用于標(biāo)記具本底熒光的細(xì)胞和組織。而，DiR在體內(nèi)活體成像或者示蹤中意義非凡，因其所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過(guò)細(xì)胞和組織，并且在紅外光范圍內(nèi)，其本底熒光水平很低。

本品以DiO的高氯酸鹽形式提供，適用于熒光檢測(cè)研究

基本特性：

1） 化學(xué)名：Benzoxazolium, 3-octadecyl-2-[3-(3-octadecyl-2(3H)-benzoxazolylidene)-1-propenyl]-, perchlorate

2） 同義名：DiO perchlorate; DiOC18(3); 3,3-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate;

3） 推薦濾光器：Omega-XF100, XF23, Chroma-41001, 31001

4） CAS NO：34215-57-1

5） 分子式：C53H85ClN2O6

6） 分子量：881.72g/mol

7） 外觀：橙黃至橙色固體

8） 純度：≥98%

9） Ex/Em：484/501 nm（甲醇）

10）溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

11）推薦濾光器：Omega-XF100,XF23,Chroma-41001,31001

保存條件: 

-2-8oC干燥避光保存，有效期一年。

產(chǎn)品使用： 【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)條件做出調(diào)整。

1. 染色液制備

1）儲(chǔ)存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5mM的儲(chǔ)存液。例如，取25mgDiO（Mw：881.72g/mol）溶于5.67ml無(wú)水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲(chǔ)存液。

【注意】未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融，且要避光保存。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)存液，調(diào)整到1～5μM的工作濃度。

【注意】工作液最終濃度需要根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區(qū)間進(jìn)行最優(yōu)濃度的摸索。

2. 懸浮細(xì)胞染色

1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

3）孵育結(jié)束，按1000～1500rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

5）再重復(fù)3），4）步驟兩次。

3. 貼壁細(xì)胞染色

1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。

2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，濾掉過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的小室內(nèi)。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

4）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

5）吸掉染色工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10min，然后吸走培養(yǎng)基。

4、顯微鏡檢測(cè)

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA濾光器的選擇參見下表：

2）多色染料的同時(shí)檢測(cè)，濾光器按照以下設(shè)定：

a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；

b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；

c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005；

5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細(xì)胞分別用流式細(xì)胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

相關(guān)產(chǎn)品：