FerroOrange (Fe2+indicator)   亞鐵離子熒光探針

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

FerroOrange是一種特異性檢測(cè)不穩(wěn)定的鐵(II)離子（Fe²⁺）的熒光探針，定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）。一旦與Fe²⁺反應(yīng)后，不可逆的生成一種橙色熒光產(chǎn)物（Absmax=542nm，FLmax

=572nm，圖1. FerroOrange的光譜特征）。鐵（III）離子（Fe³⁺）或其它除鐵離子以外的二價(jià)金屬離子都不會(huì)使其熒光增強(qiáng)（見圖2. FerroOrange的反應(yīng)特異性）。FerroOrange也不會(huì)與鐵蛋白和其它物質(zhì)中的螯合鐵反應(yīng)。FerroOrange具強(qiáng)細(xì)胞膜滲透性和低細(xì)胞毒性（見附圖3. FerroOrange的細(xì)胞毒性測(cè)定），非常適用于活細(xì)胞成像。

圖1. FerroOrange的光譜特征。FerroOrange在0.05M HEPES buffer, pH 7.4內(nèi)的吸收光譜（左）和熒光光譜。最大吸收波長(zhǎng)在542nm，最大熒光光譜在572nm。一旦與Fe²⁺反應(yīng)，熒光強(qiáng)度顯著增加。

圖2. FerroOrange的反應(yīng)特異性。FerroOrange與各種金屬離子（左），活性氧或還原劑（右）的反應(yīng)性。僅當(dāng)與Fe²⁺反應(yīng)，FerroOrange呈強(qiáng)熒光。

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

產(chǎn)品使用：

1. 需要自行準(zhǔn)備的材料

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)DMSO

1.2 合適的清洗和觀察緩沖液（比如：PBS, pH 7.4；HBSS；無(wú)血清培養(yǎng)基等）。不要含酚紅。

2. 探針準(zhǔn)備

2.1 從冰箱取出FerroOrange，置于室溫至少30min，將其置于微量離心機(jī)內(nèi)低速離心。將瓶?jī)?nèi)的粉末離心到管底后，再開蓋。

2.2 往一管FerroOrange（24μg）內(nèi)加入35μl高質(zhì)量DMSO，用槍反復(fù)吹吸5次或以上，使其完全溶解即得到1mM FerroOrange儲(chǔ)存液。若單次不能用完儲(chǔ)存液，請(qǐng)根據(jù)單次用量分裝，置于-20℃避光保存，一個(gè)月內(nèi)使用。

2.3 于正式實(shí)驗(yàn)前，用中性緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)基來稀釋1mM FerroOrange儲(chǔ)存液到所需工作濃度（比如：1μM），工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，盡快用完?！咀⒁猓核嵝匀芤簳?huì)氧化FerroOrange，嚴(yán)重影響探針的效率】。

3. 染色步驟

3.1  從玻璃底培養(yǎng)皿上培養(yǎng)的細(xì)胞中吸掉培養(yǎng)液。
3.2  吸掉上清液，用 HBSS 清洗細(xì)胞 2 次。
3.3  加入含 1μM  FerroOrange 的染色工作液，于 37℃，5% CO₂ 培養(yǎng)箱中孵育 60min。
3.4  在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。

4. 熒光檢測(cè)

對(duì)于熒光顯微鏡：通用的G激發(fā)濾片比如Cy3檢測(cè)用的濾片。

對(duì)于激光顯微鏡和流式細(xì)胞儀：532nm，514nm或561nm激光器用于激發(fā)。實(shí)在沒有，亦可用488nm激光器。發(fā)射波長(zhǎng)為572nm。

附錄 FerroOrange的細(xì)胞毒性：

圖3. 各種濃度FerroOrange對(duì)HepG2細(xì)胞的代謝活性。不同濃度的FerroOrange（以1% DMSO作為共溶劑）加入細(xì)胞內(nèi)，培養(yǎng)24h后，用MTT法測(cè)定代謝活性。（n=3）

附錄FerroOrange的胞內(nèi)定位：

圖4. FerroOrange的胞內(nèi)定位。將FerroOrange（紅色）, ER Tracker（綠色）和Hoechist 3342（藍(lán)色）加載進(jìn)入HT-1080細(xì)胞并成像觀察。FerroOrange主要定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。Bar：10 μm。

注意事項(xiàng)：

1.      FerroOrange主要定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（見附圖4），但也可能檢測(cè)細(xì)胞質(zhì)池內(nèi)的Fe²⁺，目前針對(duì)這一點(diǎn)未做明確評(píng)估。

2.      熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

3.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

相關(guān)產(chǎn)品：